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在氨基酸組分測定中，紫外檢測器的最佳檢測波長范圍需根據(jù)氨基酸類型及檢測方法綜合確定，核心結(jié)論為：芳香族氨基酸（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸）的最佳檢測波長為280nm；衍生化氨基酸的檢測波長需根據(jù)衍生試劑特性選擇，常見范圍為220-248nm；非衍生化氨基酸的直接檢測波長通常低于220nm，但靈敏度較低。以下為具體分析：
色氨酸：具有最強的紫外吸收能力，其最大吸收峰波長為280nm。在氨基酸組分測定中，若目標(biāo)氨基酸包含色氨酸，280nm是最佳檢測波長。
酪氨酸：其最大吸收波長為275nm，但通常與色氨酸一起，在280nm波長下進(jìn)行檢測，因為該波長下兩者的吸收均較為顯著。
苯丙氨酸：雖然其最大吸收波長略低于280nm，但在280nm波長下仍有一定的吸收，因此也可與色氨酸、酪氨酸一起在該波長下進(jìn)行檢測。
衍生化目的：由于大部分氨基酸在220nm波長以下才有紫外光吸收，且紫外吸收較弱，同時氨基酸極性偏大，用反相方法分析時保留能力差，不易于分離。因此，一般的檢測方法在檢測氨基酸時需要進(jìn)行柱前或柱后的衍生，使氨基酸易于分離且有較好的紫外吸收。
常見衍生試劑：如異硫氰酸熒光素（FITC）、鄰苯二甲醛（OPA）等。這些衍生試劑與氨基酸反應(yīng)后，生成的衍生物具有特定的紫外吸收波長。
檢測波長選擇：
FITC衍生：衍生物的激發(fā)波長為490nm，發(fā)射波長為515nm。但通常使用紫外檢測器時，關(guān)注的是其吸收波長，而非發(fā)射波長。不過，這一信息說明了FITC衍生后氨基酸的檢測波長會發(fā)生變化。
OPA衍生：除胱氨酸和半胱氨酸外，OPA能在2-巰基乙醇或3-巰基丙酸存在的條件下，與一級氨基酸反應(yīng)生成熒光化合物，其激發(fā)波長為340nm，發(fā)射波長為455nm。同樣地，使用紫外檢測器時，應(yīng)關(guān)注其吸收特性。實際上，OPA衍生后的氨基酸通常在246-248nm波長范圍內(nèi)有最大吸收。
其他衍生試劑：如AQC等，與氨基酸反應(yīng)后的衍生產(chǎn)物也具有特定的紫外吸收波長。有研究表明，20種氨基酸與AQC反應(yīng)后的衍生產(chǎn)物在226-248nm波長范圍內(nèi)有最大吸收，其中多數(shù)氨基酸在247nm或248nm波長時有最大吸收。
直接檢測限制：非衍生化的氨基酸在紫外區(qū)的吸收較弱，且大多數(shù)氨基酸在220nm波長以下才有顯著的紫外吸收。因此，直接使用紫外檢測器檢測非衍生化氨基酸的靈敏度較低。
檢測波長選擇：若需直接檢測非衍生化氨基酸，通常需選擇低于220nm的波長。但需注意，波長越短，基線噪音越大，可能影響檢測的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。有研究考察了多個波長下的檢測效果，發(fā)現(xiàn)210nm處具有較高的靈敏度和穩(wěn)定性，因此可選用該波長作為檢測波長。然而，這一選擇并非絕對，具體波長還需根據(jù)實驗條件和儀器性能進(jìn)行優(yōu)化。
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